技术服务

🧬 PiggyBac 随机插入

转座酶识别特异性序列，将外源DNA片段随机整合到果蝇基因组中。芳景生物主要采用PiggyBac转座酶（传统的P-element技术效率较低，不推荐）。

技术特点与风险挑战

• 插入基因组的位置随机，可能获得多样化的表型。
• 存在破坏内源基因功能、或者导致转基因表型不稳定等风险。

主要应用场景

• 表型差异化分析
• 增强子捕获（enhancer trap）

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交付保种（Delivery and Conservation）

🧬 attP-PhiC31 定点插入

attP-PhiC31 定点插入技术利用整合酶 PhiC31，可以将含有 attB 位点的外源序列整合插入到特定果蝇基因组中特异的 attP 位点，获得表型稳定的果蝇品系。

多样化的 attP 果蝇品系

提供多种有效的 attP 果蝇品系，涵盖 X 染色体和 2 号、3 号染色体上的多个位点，便于进行基因重组。

• 推荐常用 attP 品系：attP40(II, 25C6)、attP2(III, 68A4) —— 效率高并且经过实验验证，被证明不影响插入位点附近的基因功能，且插入序列表型稳定。
• 推荐重组用 attP 品系：attP5(II, 50F1)、VK00005(III, 75A10) —— 适用于分别同 attP40 和 attP2 的定点插入品系进行重组构建，从而进行更复杂的课题研究。

广泛的科研应用场景

• 外源序列转入：可实现从简单到复杂序列的转入，一般推荐载体总长度小于 15 kb。
• 内、外源基因过表达：提供 5~20×UAS，实现不同程度的基因过表达；提供多种泛表达和组织特异性表达的 GAL4 品系。
• RNA 干扰：单个 shRNA 针对单基因干扰研究；多个 shRNA 串联，对多个基因进行共同干扰研究。
• 基因调控研究定制化服务：除了 GAL4-UAS 系统外，本公司也拥有其他多种基因调控研究的经验和方案可供选择，如：
  • 生殖系统表达：UASp-K10
  • 二元调控系统备选方案：lexA-lexAop，QF-QUAS-QS
  • 诱导启动或抑制表达：GeneSwitch，GAL80
  • Split-GAL4：p65AD，GAL4DBD
  • 增强子表达模式研究：GMR-FlyLight，VT 系列等

技术服务流程

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🧬 GAL4-UAS 转基因

利用 attP-PhiC31 转基因技术，把外源物种目标基因转入黑腹果蝇基因组，通过 GAL4-UAS 二元调控系统，让基因在果蝇体内高量表达并进行表型研究。这样，即可利用黑腹果蝇的科研优势，将非模式物种基因功能研究简单化、成熟化和标准化。

全身温控过表达解决方案

• 技术难题：当 GAL4 由全身表达的强启动子驱动时，UAS 下游的外源基因会在黑腹果蝇绝大部分细胞过量表达，进而可能产生毒性，导致果蝇生存能力下降甚至死亡。
• 解决方案：芳景生物制作并提供了 Tubp-GAL4, Tubp-GAL80^ts 果蝇品系，通过饲养温度变化控制外源基因表达量，保证在低温时，转基因果蝇可以顺利生存和扩增，同时也保证高温热激之后，目的外源基因进行过量表达。

其他 GAL4-UAS 品系构建

除 Tubp-GAL4, Tubp-GAL80^ts 品系外，芳景生物还可提供多种 GAL4 驱动品系，并负责与 UAS 转基因品系构建成稳定遗传品系，实现外源基因在果蝇中的时空特异性稳定表达。

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