载体构建 服务
质粒亚克隆 · 基因组 DNA 克隆 · 反转录 cDNA 克隆 · 覆盖 4 类应用载体的全场景构建
原理 · 流程 · 优势 · 适用
技术原理
通过限制性酶切或无缝克隆将目的片段连接到目标载体骨架中，转化感受态细胞后经抗性筛选与菌落 PCR 鉴定获得阳性克隆，最终通过 Sanger 测序验证插入序列的准确性。按片段来源可分为三类：质粒亚克隆（从已有质粒切取）、基因组 DNA 克隆（直接从生物体基因组扩增）、反转录 cDNA 克隆（从 mRNA 反转录获得）。
工作流程
载体设计
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片段获取
→
酶切连接
→
转化筛选
→
测序验证
核心优势
- 三种克隆方式灵活组合
- 4 类应用载体可选（昆虫 / 大肠杆菌 / 哺乳动物 / 多功能）
- 无缝克隆 / 限制性酶切双方案
- 全 Sanger 测序验证保证序列准确性
典型适用
重组质粒的典型结构
载体构建标准流程
| 实验步骤 | 内容 | 周期(周) |
|---|---|---|
| 载体设计与引物合成 |
|
0.5~1 |
| 片段获取 |
|
1~1.5 |
| 酶切连接 |
|
0.5 |
| 转化与筛选 |
|
0.5 |
| 测序验证 |
|
1 |
| 合计 | — | 3~4 |